TEST DE DETECCIÓN
DE ANTIBIÓTICOS EN CEREALES Y PIENSOS CON ECLIPSE 100 O SCREENING
PLUS:
Protocolo de extracción :
1.Se realizará una homogenización del pienso (sin
necesidad de moler ni manipular).
2.Pesada de 0, 2 a 1 gramos de pienso según sea medicado o blanco.
3.Disolver en 100 mililítros de buffer o 20
de ese mismo tampón
( buffer de
extracción ) según el pienso.
2ª dilución de medicados 1/10 buffer.
4.Agitar en Multimix ( agitador magnético ) o similar
durante 2 a
3 horas. RPM 600.
5.Cesar la agitación y analizar sin esperar los 5
minutos.
6.Tomar una alícuota de 100 microlitros para el
análisis. Realizar por duplicado. Sellar.
7.Tras la inoculación de cada pocillo, incubar 1 hora
a temperatura ambiente.
8.Lavar tres veces y secar. Sellar bien la tira de
pocillos!!!.
9.Incubar a 65ºC durante 2 horas y diez o y cuarto.
10. Lectura de resultados. Serán positivos todos los
que NO presenten un viraje a amarillo ,
desde grises a azul-violeta ( existencia de algún tono azul en el pocillo ).
Antimicrobiano
en Pienso( mg/ Kg ) = [ LD en buffer (ug/ L) x Vol. Diluyente ( L )] / Peso pienso
( g)
( g)
Precauciones:
NO PROLONGAR MAS DE 2, 15 HRS EL TIEMPO DE LA 2ª INCUBACIÓN (mirar
certificado técnico, normalmente 2,10 hrs o poner un blanco).
Siempre que se prepare un buffer nuevo, ajustar el pH a 7, 4
– 7, 7 e introducirlo como estándar cero y comprobar que está libre de
inhibidores.
Siempre que se cambie de tipos de piensos se debe replantear
el tipo de dilución a utilizar para no tener problemas de interferencias de
inhibidores no antibióticos ( sólo los ha habido con piensos con gran cantidad
de tampón ). En principio con esas diluciones no debe haber problema.
El factor a aplicar será 20 o 5000 según el pienso ( blanco
o medicado ).
Se puede realizar en caso de necesitar mayor sensibilidad,
una dilución 1/10 con el mismo buffer (y mediar una centrifugación a por
ejemplo 2300 RPM)aunque también aumenta el riesgo de interferencias.
El buffer fosfato no puede ser sustituido por agua destilada
teniendo en cuenta que puede de manera inaceptable la sensibilidad para los inhibidores.
Sensibilidades: Menor de 2000 PPB en el caso de clortetraciclina y alrededor de 2000 , usando el buffer citado en el caso de sulfadiacina para pienso blanco.
Para pienso medicado se está revisando la recta de corte.
Para otros antibióticos consultar la tabla de sensibilidades
del kit.
Con agua destilada nos iríamos a una sensibilidad de 10.000
PPB o más para SDZ, según las diluciones seriadas realizadas.
El tiempo de agitación se puede reducir comprobando siempre
que los resultados son equivalentes.
En caso de positivos a dilución 1/ 20 se debería repetir
para confirmar a 1/ 50 para evitar problemas de mejor sensibilidad con LDG.
Este protocolo es propio y ya ha sido estandarizado. Ver
ficha técnica Eclipse de ZEU de mayo 2005.
PROTOCOLO PARA TWIN SENSOR:
Dilución del pienso en leche entera 1:50 o 1:100 , agitar como
en el caso de Eclipse 100 y realizar el análisis según la técnica del kit.
Comprobar la ausencia de residuos en la leche utilizada realizando un blanco
por cada litro comprado.
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